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全國范圍大革命高潮的到來，始于1925年5月上海工人反對外國資本家的罷工。

5月15日，上海內外棉七廠日本資本家槍殺工人、共產黨員顧正紅。30日，在中國共產黨領導和發動下，上海工人和學生舉行街頭宣傳和示威游行，租界英國巡捕在南京路上突然開槍，打死學生、工人等13人，傷者不計其數。這就是震驚全國的五卅慘案。以后幾天，上海和其他地方又連續發生英、日等國軍警槍殺中國民眾的事件。

五卅慘案激起全中國人民極大憤怒，多年來深埋在中國人民心里的對帝國主義的怒火一下子噴發出來，形成工人罷工、學生罷課、商人罷市的局面。黨中央決定成立上海總工會，成立上海工商學聯合委員會，加強對運動的領導。全國約有1700萬人直接參加了運動，從通商都市到偏僻鄉鎮，到處響起“打倒帝國主義”“廢除不平等條約”的怒吼。以五卅慘案為導火線，反對帝國主義的民族運動浪潮，以不可遏止的浩大聲勢迅速席卷全國，這就是五卅運動。

發生在廣州和香港的有25萬人參加的省港大罷工，是五卅運動的重要組成部分。罷工工人成立由共產黨員蘇兆征任委員長的省港罷工委員會，對香港實行封鎖。大罷工前后堅持16個月之久，10多萬集中在廣州的有組織的罷工工人，成為廣州革命政府的有力支柱。

黨在領導五卅運動中得到很大發展，黨員從1925年初不足1000人，發展到年底1萬人，不少沒有黨組織的地方建立了黨組織。為適應大革命高潮到來的新形勢，黨中央及時提出要在極短時間內將黨“從小團體過渡到集中的群眾政黨”，強調對黨員進行教育和訓練的重要性，在北京建立了所高級黨校培養干部。

在蓬勃發展的有利形勢下，國共兩黨合作進行了統一廣東革命根據地的工作。1925年，經過兩次東征和南征，消滅軍閥陳炯明部和鄧本殷部，平息楊希閔、劉震寰兩部在廣州的叛亂，統一了廣東革命根據地，為北伐戰爭準備了比較可靠的后方基地。

黨還進行了創建直接領導的革命武裝的嘗試。周恩來和中共廣東區委在孫中山支持下，以部分黨、團員為骨干，把大元帥大本營的鐵甲車隊改組為一支實際受黨指揮的革命武裝。1926年初，建立了由共產黨員葉挺指揮的國民革命軍第四軍獨立團。

在李大釗等人艱辛開拓下，北方地區的革命運動迅速發展起來。從1924年初開始，北方工人運動逐漸打破二七慘案后的消沉狀態，得到恢復和發展。北京、青島、唐山等地工人罷工斗爭此起彼伏。1925年10月，中央執委會擴大會議強調北方地區工作的重要性，決定加強對北方革命的領導。會后，中共北方區執行委員會成立，李大釗任書記。到1926年7月，在北京、天津、唐山、太原、北滿等地組建了十多個地委和幾十個特別支部、獨立支部，擁有黨員2000多人。李大釗和中共北方黨組織還進行了爭取馮玉祥及其國民軍的工作，開展了爭取關稅自主運動等。這些斗爭顯示了北方民眾革命意識的覺醒，打擊了控制北京的段祺瑞反動政府。